应用
高含量组分测定-示差法
当待测组分含量较高时，测得的吸光度值常常偏离朗伯-比尔定律。即使不发生偏离，也因为通常采用纯溶剂作参比溶液（普通光度法），使测得的吸光度太高，超出适宜的读数范围而引入较大的误差。采用示差法就能克服这一缺点。但应用示差法时，要求仪器光源有足够的发射强度或能增大光电流放大倍数，以便能调节参比溶液透光度为100%。
这就要求仪器单色器质量高，电光学系统稳定性好。
多组分分析
应用紫外可见分光光度法，常常可能在同一试样溶液中不进行分离而测定一个以上组分。假定溶液中同时存在两种组分x和y，其吸收光谱一般有重叠和不重叠两种情况。不重叠的测定组分相互不产生干扰。若吸收光谱重叠，在波长为λ1和λ2时分别测定吸光度A1和A2，由吸光度值的加和性得到联立方程，通过解联立方程求得各浓度值。
定量方法
标准曲线法
即工作曲线法，适用于大量重复的样品分析，是工厂控制分析中应用最多的方法。
根据光吸收定律，对于一种有色化合物，ε是一个定值，若把光程L也固定，那么吸光度A就和溶液的浓度c成正比，也就是说吸光度A和浓度c呈线性关系。配制一系列适当浓度的标准溶液，显色后分别测定其吸光度，把吸光度A对浓度c作图，即得工作曲线。
直接比较法
直接比较法其实质也是工作曲线法，是一种简化的工作曲线法。配一个已知被测组分浓度为cs的标样，测其吸光度为As，在同样条件下再测未知样品的吸光度为Ax，通过计算可求出未知样品的浓度cx。
As=εcsL
Ax=εcxL
由于溶液性质相同，比色皿厚度一样，所以As/Ax=cs/cx
式中：
cs-已知被测组分的浓度，mol/L；
cx-未知样品的浓度，mol/L；
As-已知被测组分的吸光度；
Ax-未知样品的吸光度。
直接比较法简化了绘制工作曲线的步骤，适用于个别样品的测定。
操作时应注意配制标样的浓度要接近被测样品的浓度，这样能减少测量误差。
标准加入法
标准加入法是工作曲线的一种特殊应用。选择适当的显色条件，先测定浓度为cx的未知样品吸光度为Ax，再向未知样品中加入一定量的标样，配置成浓度为cx+Δc1、cx+Δc2……一系列样品，分别显色后再测定吸光度为A1、A2……最后在坐标纸上绘图，以吸光度A为纵坐标，以浓度c为横坐标，分别画出Δc1、Δc2所对应的A1、A2等各点，连成直线后延长，与横轴的交点cx也就是未知样品的浓度cs。
应用标准加入法时要注意，加入的标样浓度要适当，使画出的曲线保持适当角度，浓度过大或过小都会带来测量误差。这种方法操作比较麻烦，不适于作系列样品分析，但它适用于组成比较复杂，干扰因素较多而又不太清楚的样品，因为它能消除背景的影响。
紫外可见分光光度计使用中的注意点
保护光源
光源灯有一定的寿命，仪器不工作时不要开灯，若工作间歇时间短，可不关灯。
一旦停机，则要待灯冷却后再重新启动，并预热15min。
灯泡发黑或亮度明显减弱或不稳定时，就及时更换。
经经紫外光照射后形成结痕可用无水乙醇去除。
保证合适的工作环境
温度和湿度是影响仪器性能的重要因素。
不适宜的温度和湿度可引起机械部件的锈蚀，使金属镜面的光洁度下降，引起仪器机械部分的误差或性能下降。造成光栅、反射镜、聚焦镜等光学部件的铝膜锈蚀，产生光能不足、杂散光、噪声等。甚至使仪器停止工作，从而影响仪器寿命。维护保养时应定期加以校正温度和湿度。实验室，特别是地处南方地区的实验室，应具备四季恒温的仪器室，配备恒温设备。环境中的尘埃和腐蚀性气体也可以影响机械系统的灵活性、降低各种限位开关、按键、光电耦合器的可靠性，也是造成光学部件铝膜锈蚀的原因之一。因此必须定期清洁，保障环境和仪器内卫生条件，防尘。
定期除尘、调校
仪器使用一定时间后，内部会积累一定量的尘埃，最好由维修工程师或在工程师指导下定期开启仪器外罩对内部进行除尘工作，同时将各发热元件的散热器重新紧固，对光学盒的密封窗口进行清洁，必要时对光路进行校准，对机械部分进行清洁和必要的润滑，最后恢复原状，再进行一些必要的检测、调校和记录。
正确使用比色皿
拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。清洗比色皿时，先用水冲洗，再用蒸馏水洗净。若被比色皿被有机物沾污，可用盐酸-乙醇混合洗涤液（1:2）浸泡片刻，再用水冲洗。每次做完实验应立即洗净比色皿。比色皿外壁的水用擦镜纸或细软的吸水纸吸干，以保护透光面。测定有色溶液吸光度时，一定要用有色溶液洗比色皿内壁几次，以免改变有色溶液的浓度。在测定一系列溶液的吸光度时，通常都按由稀到浓的顺序测定，以减少测量误差。
若分光光度计噪音比较大，有可能是光源灯泡使用时间超过寿命期，可更换光源灯泡。
若自检时提示波长自检出错，有可能是自检过程中打开过仪器样品室的盖子，可关上仪器样品室盖子，重新自检。
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