冷冻干燥机在病毒标准物质研究中的应用
发布日期:2022/12/28 10:31:14

病毒是一种个体微小,结构简单,只含一种核酸DNA或RNA,必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。病毒是一种非细胞生命形态,它由一个核酸长链和蛋白质外壳构成,病毒没有自己的代谢机构,没有酶系统。

真空冻干病毒

冷冻干燥全称真空冷冻干燥,简称冻干,是在低温减压条件下,利用水的升华使制品低温脱水而达到干燥的一种技术。冻干在低温低氧条件下进行,多数生物反应停滞,且处理过程无液态水存在,使物料原有结构和形状得到大程度的保护。

真空冻干病毒比较稳定,可于室温短期保存, 4~8℃长期保存。此法综合利用了各种有利于毒种保存的因素,具有成活率高,变异性小等优点,是常用的较理想的毒种保存方法之一。病毒疫苗冻干主要关注的是冻干后病毒滴度、残余水分、热稳定性、抗原性及相关免疫实验。

冻干病毒会使用保护剂,保护剂一般采用脱脂牛奶或血清、人血白蛋白等,作用机理是在冷冻干燥的脱水过程中稳定病毒结构,防止细胞膜受冷冻或干燥而造成损伤。


实验过程

第一步

将灭活后的病毒液制备蓝耳病病毒核酸检测标准物质,将纯化后的病毒进行无菌检测、外源性病毒检测。

第二步

将冻干保护剂与蓝耳病病毒液混合摇匀后,移液分装至10支容量为3 mL的具十字橡胶塞的无菌瓶中(十字塞的十字部分插入瓶中,塞冒悬于瓶口),每支1 mL试样。

第三步

将10支分装好的试样瓶置于-80 ℃的预冻30 min后取出,预冻后样品瓶置于冷阱温度已达-45 ℃的冻干仓中,运行真空泵开始冻干,一直到样品质量不发生变化时冻干结束并在真空状态下压盖密封十字橡胶塞,得到冻干后的样品。

第四步

采用实时荧光定量RT-PCR方法检测蓝耳病病毒标准物质的均匀性、稳定性,得到蓝耳病病毒检测标准物质也为该病毒定性和定量检测提供标准物质。

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