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生物安全实验室是进行生物安全操作的主要阵地，生物安全柜是生物安全实验中的重要装备。我们就大家比较关心的医疗机构生物安全，特别是生物安全柜的相关知识进行了梳理，上期重点分享了生物安全柜、加强型生物安全二级实验室等相关定义和病原微生物分类、生物安全实验室防护水平分级、生物安全柜分类等。本期重点分享生物安全柜的管理。
一、日常使用生物安全柜时的注意事项
生物安全柜的垂直可移动窗开启与关闭应轻便，在行程范围内的任何位置不产生卡死现象，不应有明显的左右或前后晃动现象，滑动应顺畅。开关、按键的操作应灵活可靠，零部件应紧固无松动，指示正确。
工作前预先放好实验材料、只放入实验必需的实验材料和物品，防止生物安全柜过载。可高压灭菌的收集生物危害性实验废弃物的容器、消毒剂及配套的消毒工具也应放人安全柜内，以避免操作者的手臂在玻璃悬窗进口处快速移动或频繁进出干扰安全柜内的气流，降低了对检验人员和物品的防护。
实验材料和物品应按照从清洁区、半污染区到污染区的方向顺序摆放，三个区域之间应无交叉，操作过程中应方便拿取，以避免交叉污染。
放置到生物安全柜内的实验用材料和物品应用70%的酒精或其他中性消毒剂擦拭表面清除污染，以避免污染的物品放人生物安全柜。
可能产生气溶胶的设备，如混匀器、离心机等应放置在生物安全柜的后部，离心机不得被放置在I级和Ⅱ级生物安全柜内。
实验材料和物品应尽可能的放置在靠近生物安全柜工作台面后边缘且不遮挡前部、后部和侧部进气格栅的位置。体积较大的实验材料和物品，如盛放吸管的盘子、抽滤瓶等彼此间应留有距离，并放在生物安全柜内的一侧避免在实验期间移动。不阻断前后空气格栅、减少干扰气流。避免使用干扰生物安全柜内气流流动的设备和实验步骤
操作人员的双臂以垂直方向缓慢伸入生物安全柜内，至少等待1min使生物安全柜内的气流稳定后再进行操作，以避免干扰安全柜内的气流流动。
在工作区域工作、生物安全柜处于正常工作状态时，不应有明显的机震声。
进行实验操作时应使用恰当的操作方法尽量减少溅洒或者气溶胶的产生，如有溢出及时清洁和消毒溢出。
最好用一次性接种环、电加热器灭菌接种环。
实验完毕具有潜在生物危害的实验材料和物品应消除表面污染，使用可灭菌的废弃物处理袋封装后移出生物安全柜，放入高压灭菌锅或其他灭菌装置灭菌处理。
不宜在生物安全柜内使用明火，明火易造成气流动荡，破坏高效过滤（HEPA）起源吹向台面的模式。
在关闭安全柜前应继续运行至少5分钟。
按照使用说明书指导正确使用和维修。
二、清洁消毒
工作前的自净和消毒
A.在工作前要让生物安全柜的风机至少运行3-5分钟，使柜内的空气实现自净。
B.安全柜的工作台面、内壁（不包括送风滤器扩散板）和观察窗的内表面使用70%酒精或其他中性消毒剂擦拭。消毒后再用无菌水或蒸馏水进行擦拭以清除残余消毒剂。
C.放到安全柜的容器和材料的表面使用70%乙醇擦拭，以减少将环境的污染物带到安全柜内。
D.定期对孵箱和冰箱进行消毒。
工作结束时的表面消毒
工作完成时，应对所有的容器和设备进行表面消毒并拿出安全柜。每天工作结束时，对安全柜进行最后的表面消毒，包括工作台面、安全柜的边壁、后壁、玻璃悬窗内外侧、紫外线灯管和电源输出口以及包括试验设备在内的所有物品。消毒剂可选择70%酒精或其他中性消毒剂。
在进行安全柜内部消毒时，操作人员除了手臂以外的 任何部位不得进入生物安全柜内。
三、应急处置
一般要求
A.实验开始前，应开启风机和气流指示器(如果有)等，确认生物安全柜均处于“安全”状态，如有任何故障应立即停止工作，并报告实验室主任。
B.实验开始前，操作人员应提前准备好所用应急物品，如危害物溢出应急处置物品，适宜消毒剂、毛巾、纸巾和可灭菌的废弃物处理袋等，放在随时拿到投人使用的位置。
C.生物安全柜运行时，发生任何气流异常等报警，应立即停止工作，立即报告实验室主任。
溢出物应急处置
（1）发生少量喷洒时的清洁消毒
在生物安全柜内发生少量(体积小于1ml)的喷洒时，立即用吸水纸巾进行处理，将使用过的纸巾放到生物危害包里。并根据污染物的类型选择适宜的消毒剂擦洗台面及内部所有可能受污染的物品。
（2）发生大量溢出或容器破碎时的清洁消毒
a)在生物安全柜保持运行状态，等待至少5min;
b)如操作人员的手套或防护服已经被污染，应在生物安全柜内对手套消毒后，脱下手套，带上新手套后脱掉所污染的防护服，用适当的消毒剂清洗暴露部位；
c)操作人员穿防护服、戴手套和眼罩，先用吸水纸巾吸收溢出物，再用浸有消毒剂的毛巾来覆盖溢出物，作用一段时间把气溶胶的产生控制到最小化；
d)对于溢出中等或高风险的物质，在确保排水阀关闭后，用消毒剂浸泡工作台面和排水沟，让液体通过格栅流到集水槽上，收集废液后再彻底清洗集水槽。当有危险等级为2和3的高风险物质溢出，需由有资质的人员使用甲醛熏蒸法来消毒生物安全柜；
e)覆盖溢出物的毛巾、所有柜内操作过的物品和被污染的实验材料都应使用可灭菌的废弃物处理袋封装后移出安全柜，高压灭菌或采用其它有效的灭菌方法进行处理，不适用高压灭菌应用消毒灭菌剂擦拭至少20min彻底清除表面污染；破碎的玻璃或其他锐器要用镊子或钳子处理；
f)用消毒剂擦拭生物安全柜内壁、工作表面以及玻璃悬窗内侧，作用一定时间后，用洁净水擦干净消毒剂残留；
g)处理完毕操作人员应更换污染的防护服及手套，封装后按照实验室医疗废物进行处理，并用肥皂和清水清洗手和暴露的皮肤；
h)全部步骤结束后生物安全柜应继续运行2min~3min以清除工作区域内浮尘污染；
i)再次使用前生物安全柜应至少运行15min再开始实验操作。
（3）如果溢洒物流人生物安全柜内部或需要浸泡集水槽，在清理前应报告设备管理员，需要评估后再采取适当的措施。
四、日常维护
定期清洁操作台面和前窗玻璃；
保持室内空气质量,延长高效过滤器使用寿命；
定期检测紫外灯的照射强度,及时更换灯管；
长期不用应定期进行维护性运行；
高效过滤器应定期检测，及时更换；
做好使用和维护记录。
五、生物安全柜的检测要求
根据WS 233-2002《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》的相关规定，有下列情况之一时，必须对生物安全柜进行现场检测：
（1）生物安全实验室竣工后，投入使用前，生物安全柜已安装完毕；
（2）生物安全柜被移动位置后。
（3）生物安全柜进行检修后。
（4）生物安全柜更换高效过滤器后。
（5）生物安全柜一年一度的常规现场检测
依据SNT3901-2014《生物安全柜使用和管理规范》，在生物安全柜的检定周期内应至少开展1次生物安全柜的期间核查，实验室可根据生物安全柜的使用频次和实验室所开展的检测工作的危害程度增加期间核查次数。期间核查的内容至少应包括垂直气流平均风速、工作窗口气流流向、洁净度。
小结
生物安全柜在实验室生物安全防护上有着重要的作用，只有规范其使用管理，才能充分发挥生物安全柜的防护性能，规避感染风险，实现真正意义上的实验室生物安全。
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